文献类型：会议论文

中文题名：绿原酸与阿魏酸对CHO细胞线粒体功能影响的差别

作者：毕婷婷[1];孙健[1];赵晓红[1];

第一作者：毕婷婷

机构：[1]北京联合大学功能食品科学技术研究院;

第一机构：北京联合大学应用文理学院|北京联合大学生物化学工程学院功能食品科学技术研究院

会议论文集：2014线粒体毒性与基于毒性通路的安全性评价新策略学术研讨会暨中国毒理学会毒理学替代法与转化毒理学专业委员会成立大会论文集

会议日期：20141012

会议地点：中国北京

主办单位：中国毒理学会（Chinese Society of Toxicology(CSOT)）

语种：中文

中文关键词：绿原酸;阿魏酸;ROS;细胞色素C;线粒体膜电位

摘要：目的线粒体是一种重要的细胞器,在各种刺激作用下,极易造成线粒体结构和功能变化,因此通过研究线粒体的功能变化探讨植物活性物质对机体作用的影响及其机制,为开展功能因子毒性作用剂量-效应关系研究、体外安全评价敏感指标选择和开发食用安全的第三代功能食品提供科学依据。方法本研究选择绿原酸和阿魏酸作用于中国仓鼠卵巢正常细胞(CHO),分别用0、12.5、25、50、100、200、400、800、1600、3200μmol/L剂量作用细胞24h后,采用CCK-8法检测细胞增殖率并计算IC_(50)。两种单体分别以其的IC50值、1/2 IC50值、1/4 IC50值和1/8 IC50值作为实验组剂量,处理CHO细胞24h后,用荧光探针JC-1和DCFH-DA分别孵育细胞,IN Cell Analyzer1000活细胞成像系统拍摄膜电位和ROS变化的荧光图片,检测线粒体膜电位和细胞内ROS的变化;采用萤火虫和荧光素酶的生物荧光技术检测细胞内ATP的变化;Western Blot法检测细胞内细胞色素C的生成情况并比较两种物质在细胞毒性作用剂量下对线粒体的毒性大小的差别。结果(1)采用CCK-8得到绿原酸、阿魏酸的细胞增殖率并计算得到它们的IC_(50)值分别为:2726.11μmol/L,和1680.28μmol/L,可见两者的毒性较小,但以阿魏酸的毒性更大。(2)膜电位的检测结果显示,与空白对照组比较,绿原酸仅在IC50剂量下膜电位降低有显著性差异(p<0.05),而阿魏酸在IC50、1/2 IC_(50)浓度下膜电位降低(p<0.05或p<0.01)。(3)检测胞内ROS的变化,与空白对照组比较,绿原酸仅在IC50剂量ROS增加明显(p<0.05),而阿魏酸在:IC50、1/2 IC_(50)浓度下引起ROS增加(p<0.05或p<0.01)。(4)检测胞内ROS的变化,与空白对照组比较,绿原酸仅在IC50剂量ATP生成明显降低(p<0.05),而阿魏酸在IC50、1/2 IC50浓度下引起ATP生成减少(p<0.05或p<0.01)。(5)细胞色素C释放量的测定结果显示绿原酸对胞内蛋白含量无显著性差异(p>0.05);而阿魏酸IC_(50)浓度处理下与空白组比较具有极显著差异(p<0.01),1/2 IC_(50)浓度处理下具有显著性差异(p<0.05),其余处理无差异(p>0.05)。结论阿魏酸的细胞毒性作用比绿原酸的细胞毒性作用大。毒性剂量下两种物质均会影响线粒体功能,以阿魏酸作用明显,而作用剂量小于1/2IC_(50)时对CHO细胞线粒体功能未显示明显的影响。