文献类型：期刊文献

中文题名：中国林蛙细胞毒性核糖核酸酶的原核表达

英文题名：Prokaryotic Expression of Rana Dybowskii Cytotoxic Ribonuclease

作者：范美音[1];董安康[1];吴琼[1];陶凤云[1];赵伟[1]

第一作者：范美音

机构：[1]北京联合大学生物化学工程学院

第一机构：北京联合大学生物化学工程学院

年份：2011

卷号：21

期号：1

起止页码：25-27

中文期刊名：生物技术

外文期刊名：Biotechnology

收录：北大核心:【北大核心2008】；CSCD:【CSCD_E2011_2012】；

基金：北京市教育委员会科技发展计划面上项目(KM200411417014)资助

语种：中文

中文关键词：中国林蛙;核糖核酸酶;细胞毒性;原核表达

外文关键词：Rana Dybowskii; ribonuclease; cytotoxicity; prokaryotic expression

摘要：目的:利用大肠杆菌以非包涵体的形式表达中国两栖动物林蛙的细胞毒性核糖核酸酶,探索原核表达系统表达细胞毒性核糖核酸酶的条件。方法:利用中国林蛙核糖核酸酶基因及表达质粒pFlag-CTS构建重组表达质粒,转导BL21后用IPTG诱导表达,观察不同诱导温度下细菌的生长情况。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫印迹方法进行重组蛋白的检测。结果:通过观察不同诱导温度下细菌的生长情况,发现利用较低温度可以降低宿主细胞对表达产物细胞毒性的敏感性,成功地得到了这种目的基因的表达产物。结论:低温(20℃)可以有效表达目的蛋白。
Objective：To express cytotoxic ribonuclease in a non-inclusive form from Rana Dybowskii with Escherichia coli and explore the optimum condition for expression of cytotoxic ribonuclease.Method：The recombinant expression plasmid was constructed with pFlag-CTS and ribonuclease gene of Rana Dybowskii.Then the recombinant expression plasmid was transferred into BL21 and induced by IPTG at different temperature.Meantime,the growth of BL21 was monitored with A600nm.Finally,the recombinant protein was detected by SDS-PAGE and Western Blot.Result：It was found that at lower temperature,the host was not so sensitive to the cytotoxic ribonuclease expressed.At the same condition,the target gene product was successfully expressed.Conclusion：The target protein was efficiently expressed with a lower tempreture（20℃）.